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    40%丙烯酰胺-双丙烯酰胺溶液
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    5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液
    2×Tris-Tricine-SDS-PAGE
    彩虹蛋白marker
    1.7-40 kDa
    15-150 kDa
    23-170 kDa
    10-180 kDa
    10-250 kDa
    10-310 kDa
    DNA marker
    20bp DNA ladder
    100bp DNA ladder
    100bp ladder+
    1000bp ladder
    1000bp ladder+
    DL2000bp +
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    动物大类(人)DNA提取
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M5 动物及多糖多酚双超mix(动物鼠尾及多糖多酚植物等难扩物种) 
价格:
488.00~3798.00
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品牌: 聚合美 储藏方法: 多糖多酚双超mix长期保存请置于-20˚C,有效期24个月。经常使用,可置于4˚C保存至少六个月。 直接扩增最佳伴侣,收到后置于常温保存,如果4˚C或-20˚C保存出现结晶,请将该试剂置于 37℃水浴中重新溶解后摇匀使用
货号: MF899



动物及多糖多酚双超mixMF899使用温馨提示


——Tips:各物种具体操作经验请查看最后附录


一、产品说明:

       1、根据不同物种的基因组GC/AT含量不同,我们设置了几种2x PCRmix以完成实验。

       2、对于常见GC含量均衡物种推荐MF848系列;

       3、而对于松树、杨树、棉花、黄瓜等基因组GC含量比较低,推荐MF848-AT

       4、某些海洋生物GC含量非常高,推荐MF848-GC

       5MF848MF848-ATMF848-GC三者唯一的区别就是2x PCR mix不同,其他组分和操作都相同。

       6MF899——动物及多糖多酚物种动物组织茄科、锦葵科、杨柳科、海洋藻类优先考虑,可尝试使用MF848-AT(注意加氯仿操作)



超光速mix系列产品如下

MF848-01

M5 超光速mix(鼠尾,昆虫,拟南芥,水稻,玉米,小麦等)

1mL

MF848-10

10x1mL

MF848-100

100x1mL

MF848-AT-01

M5 AT物种超光速mix(特指番茄,土豆,棉花,黄瓜,杨树,松树等)

1mL

MF848-AT-10

10x1mL

MF848-AT-100

100x1mL

MF848-GC-01

M5 GC物种超光速mix(特指褐藻,小球藻等)

1mL

MF848-GC-10

10x1mL

MF848-GC-100

100x1mL

MF899-01

M5 动物及多糖多酚双超mix(无需提取基因组DNA)

1mL

MF899-05

5x1mL

MF899-10

10x1mL


、多糖多酚双超mix (MF899)组成:

        1、裂解液叫“加强型扩增最佳伴侣”(MF859-plus

        2、2x PCR动物及多糖多酚双超mix

        3、ddH2O

三、组分说明与操作建议

1、本产品免基因组DNA提取

      “扩增最佳伴侣的作用是裂解细胞,释放出DNA当模板(请摸索最适合您实验的最佳伴侣和样本的比例关系)

       Tips

       样本太多:会超出最佳伴侣的处理上限,导致裂解不完全;

       样本太少:会造成模板浓过低,导致PCR失败;

       因为裂解液在特殊的情况下需要20-50uL,而标准裂解是20uL处理体系,可能会有客户单独购买裂解液的需求,所以也可以单独购买。

       在您收到本产品后,打开包装,扩增最佳伴侣取出放在室温,使用前看看是否有沉淀,一定要确保裂解液没有沉淀,否则按说明书在37溶解澄清后使用。

2、样本处理量建议:

       菌液、菌体和液体样本,推荐是10uL处理体系。

       而植物和动物组织,推荐是20uL加入1-2 mm2的样本;

       对于比较难处理的组织可以用50-100uL裂解液。

3、研磨小技巧:

        将黄枪头用火灼烧融化成自制的研磨杵,在0.2mLPCR管中研磨幼嫩组织或者昆虫;

        成熟叶片或较大组织,加入50-100uL裂解液在1.5mL 离心管中用研磨杵旋转挤压破壁;

        种子或很厚样本(杨树叶片)需要先用液氮研磨,再取少数样本加入50-100uL裂解液;

   务必采用适合的研磨方式来破碎组织,让细胞充分破裂释放DNA   可以通过看裂解液的颜色来判断是否充分破碎


4、建议操作步骤:

       加裂解液后,沸水浴处理3-5分钟。如果实验室没有沸水浴,也可以用PCR98处理3-5分钟

       12000rpm离心1-2分钟,取1-2uLPCR模板,剩余的放在-20保存一个月以上,以备后续再次检测。再次取出做模板时,务必12000rpm离心1-2分钟才能取上清1-2uLPCR模板。

       本产品主要针对多糖多酚的植物样本(比如棉花、烟草、番茄、杨树和一些海藻)和动物鼠尾等样本,在沸水浴冷却到室温,加入等体积的氯仿振荡处理,然后12000rpm离心2分钟取上清,效果会有很大改善。

      PCR程序设置:PCR延伸速度降下来,平时是5-10/kb 现在要变成30-60/kb。因为在粗提物为模版的PCR中速度慢,好比类似在水里跑步和 陆地跑步!

      PCR循环数:CTAB提取的DNA纯度高,浓度大,而本产品处理的DNA模板是粗提物,循环数要比以前用CTAB模板增加2-3个循环,效果会好很多



M5 动物及多糖多酚双超mix(无需提取基因组DNA)说明书




产品名称

规格

货号

M5 动物及多糖多酚双超mix   

1 mL

MF898-01

M5 动物及多糖多酚双超mix   

5 x 1ml

MF898-05

M5 动物及多糖多酚双超mix   

10 × 1 mL

MF898-10



:无染料款可定制、更大规格可定制,请提前与公司人员联系。


【储存条件】


       1、动物及多糖多酚双超mix长期保存请置于-20˚C,有效期24个月。经常使用,可置于4˚C保存至少六个月。

       2、直接扩增最佳伴侣,收到后置于常温保存,如果4˚C-20˚C保存出现结晶,请将该试剂置于37水浴中重新溶解后摇匀使用。


【产品简介】



  本产品包含聚合美特制的加强型M5动物及加强型双超mix直接扩增最佳伴侣可以迅速裂解酵母、农杆菌、革兰氏阳性菌、放线菌等微生物的细胞壁,短暂煮沸后的液体可以直接作为PCR模板;同样可以用于动植物组织细胞样品的裂解,是各种粗样品直接PCR的必备神器,可兼容普通Taq酶或高保真酶的下游PCR扩增。


  本产品包含聚合美特制Best W5 HiPer High-Fidelity DNA PolymerasedNTPsMgCl2、反应缓冲液、PCR反应的增强剂、优化剂以及稳定剂,浓度为

Best W5 HiPer High-Fidelity DNA Polymerase比普通Taq酶扩增效率高、错配率低,具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好、扩增速度快(30-601kb等优点。可最大限度地减少人为误差,可用于高特异性PCR反应及GC含量较高(>60%)具有二级结构等复杂模板的扩增和大规模基因检测。PCR 产物是平末端,纯化后可直接用于TA 载体克隆(货号MF021MF022)

本产品有含红色染料,在PCR 反应完成后,不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳;也可经过纯化处理,以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。红色染料可指示电泳进程,其迁移速度在1% TAE琼脂糖凝胶中与800 bp 双链DNA 片段相近。


【产品组份】

                                                                            储存温度      MF899-01       MF899-05      MF899-10

          2x M5动物及多糖多酚双超mix                   -20˚C               1 ml              5x1ml           10x1ml

          M5加强型动物及多糖多酚最佳伴侣           常温                  2 ml              5x2ml           10x2ml

          Nuclease-free ddH2O                                 常温                 1 ml              5x1ml           10x1ml


【适用范围】


        1.基因检测:本产品不同批次之间误差很小,特别适合大规模基因检测、半定量PCR实验和微量DNA的检测。

        2.用于从复杂模板中如基因组等扩增PCR产物,如表达基因的克隆、基因的定点突变和细胞内基因点突变的分析(SNP)等。



【所需试剂】


  使用者仅需准备PCR反应的模板和引物等。




***【样本处理方法】***

A、裂解液处理组织样品时取样切勿太多:10-20uL裂解液加入1-2mm21-2平方毫米)大小样本为宜!

B、裂解液处理后的用做PCR模板,加入的量不要超过PCR体系的1/10

1、菌液样品

   将培养至对数生长期的菌液(酵母、革兰氏阳性菌、农杆菌、放线菌培养液等)以菌液和裂解液体积比1:2混合(5uL菌液:10uL最佳伴侣),直接沸水浴3-5分钟,短暂离心后取1-2µL作为后续PCR模板。

2、平板上的菌落

  用灭菌枪头挑取少量菌体,加入10 µL最佳伴侣,吹吸混匀,95 ˚C或沸水浴3-5 分钟,12000rpm离心1-2分钟,取1-2µL作为后续 PCR模板。

3、血液或其他液体样品(尿液、组织液或者各种体液)

   以液体样本和裂解液体积比1:2混合(5uL样本:10uL最佳伴侣),95 ˚C或煮沸3-5分钟,12000rpm离心1-2分钟,取1-2µL作为后续PCR模板。

4、植物组织样品(幼嫩叶片,果实、种子、根组织等)

       50uL裂解液加入2-3mm2样本,将固体样品尽量研磨,煮沸3-5分钟,(棉花、烟草、杨树、番茄、柑橘多糖多酚类样本,等上述样本冷却到室温加入50uL氯仿,Vortex 10),12000rpm离心2分钟,取1-2µL作为后续PCR模板。

制备样本小技巧:

      、沿用实验室已有处理样本的流程(液氮速冻,冻完尽快打样),原来怎么取样就怎么取,用钢珠怎么打样就怎么打。

      、然后尽快用牙签挑取一点打碎的样本到20ul裂解液中,这步非常关键,完全解决了因为客户采样多少带来的油多坏菜问题。

      、后续就按我们推荐的95度加热5分钟,然后12000rpm离心2分钟取1-2ul上清做PCR

5、动物组织样品(鼠尾、鼠耳等组织)

20uL裂解液加入2mm2样本,将固体样品尽量研磨,煮沸3-5分钟,(鼠尾、鼠趾富含胶质样本,等上述样本冷却到室温加入20uL氯仿,Vortex 1012000rpm离心1-2分钟,取1-2µL作为后续PCR模板。

6、 土壤等环境组织样品

20uL裂解液加入2mm22平方毫米)样本,将固体样品尽量研磨,95 ˚C或煮沸3-5分钟,12000rpm离心1-2分钟,取1-2µL作为后续PCR模板。

PCR操作示例】


按下表配制PCR反应体系(冰上操作):

TempLate DNA(上述步骤准备)   

1-2µL

2x M5 Hiper超光速mix (with bLue dye)                         

10 μL

Primer 1   (10 μM)                     

0.5 µL

Primer 2   (10 μM)                     

0.5 µL

NucLease-free   ddH2O补足至

20 µL

建议的PCR条件

95°C

3 min.

32-36   *cycLes of


94°C

25 sec.

55–64°C

25 sec.

72°C

30-60sec.** /   kb DNA

72°C

5 min.

4°C

forever

PCR程序设置注意事项】

* 以粗提物为模板做PCR,因为模板量更少,PCR循环数应比用CTAB提取DNA做模板2-3个循环

** 以粗提物为模板做PCR,杂质比较多,降低扩增速有利于得到稳定结果,建议延伸60/1kb

备注

本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时,本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。









以下为附录部分



烟草、番茄、马铃薯(茄科)图位克隆或转基因鉴定


细胞壁特性:纤维素、果胶、大量角质和蜡质,细胞内含有大量多糖多酚物质,裂解液和高温加热能够破壁。

是否需要研磨:需要充分研磨。

选择货号:优先选择MF898,可以尝试MF848-AT

片段长度:尽量不要超过500bp,如果大于500bp,请用聚合美超保真mix(MF743)

样本选择:可考虑请鉴定完毕后再移栽阳性苗到土里!

  方案1:平皿上培养2周的幼苗根组织。

        ①根部没有叶绿素,细胞壁特别薄,根尖的细胞密集,处理起来方便;

        ②长出侧根后,取2-3条做鉴定不影响苗子存活

        ③鉴定完毕再移栽节省劳动力和实验室温室空间。

  方案2:幼嫩叶片。

细胞壁较好破碎(成熟叶片或者种子,研磨时需要更加使劲,裂解液由20µl变成50µl

  其他选择:如果实验室已经有成熟的样本采集和磨样方法(八联排或者96孔板处理样本),一切照旧,只需在研磨完后向每个样本加入20µl-50µl裂解液(视样本年龄和软硬程度),进行后续加热和离心操作。

***【样本处理方法】***

A、裂解液处理组织样品时取样切勿太多:10-20uL裂解液加入1-2mm21-2平方毫米)大小样本为宜!

B、裂解液处理后的用做PCR模板,加入的量不要超过PCR体系的1/10

1、菌液样品

   将培养至对数生长期的菌液(酵母、革兰氏阳性菌、农杆菌、放线菌培养液等)以菌液和裂解液体积比1:2混合(5uL菌液:10uL最佳伴侣),直接沸水浴3-5分钟,短暂离心后取1-2µL作为后续PCR模板。

2、平板上的菌落

  用灭菌枪头挑取少量菌体,加入10 µL最佳伴侣,吹吸混匀,95 ˚C或沸水浴3-5 分钟,12000rpm离心1-2分钟,取1-2µL作为后续 PCR模板。

3、血液或其他液体样品(尿液、组织液或者各种体液)

   以液体样本和裂解液体积比1:2混合(5uL样本:10uL最佳伴侣),95 ˚C或煮沸3-5分钟,12000rpm离心1-2分钟,取1-2µL作为后续PCR模板。

4、植物组织样品(幼嫩叶片,果实、种子、根组织等)

      50uL裂解液加入2-3mm2样本,将固体样品尽量研磨,煮沸3-5分钟,(棉花、烟草、杨树、番茄、柑橘多糖多酚类样本,等上述样本冷却到室温加入50uL氯仿,Vortex 10),12000rpm离心2分钟,取1-2µL作为后续PCR模板。

制备样本小技巧:

      、沿用实验室已有处理样本的流程(液氮速冻,冻完尽快打样),原来怎么取样就怎么取,用钢珠怎么打样就怎么打。

      、然后尽快用牙签挑取一点打碎的样本到20ul裂解液中,这步非常关键,完全解决了因为客户采样多少带来的油多坏菜问题。

      、后续就按我们推荐的95度加热5分钟,然后12000rpm离心2分钟取1-2ul上清做PCR

5、动物组织样品(鼠尾、鼠耳等组织)

       20uL裂解液加入2mm2样本,将固体样品尽量研磨,煮沸3-5分钟,(鼠尾、鼠趾富含胶质样本,等上述样本冷却到室温加入20uL氯仿,Vortex 1012000rpm离心1-2分钟,取1-2µL作为后续PCR模板。

6、 土壤等环境组织样品

      20uL裂解液加入2mm22平方毫米)样本,将固体样品尽量研磨,95 ˚C或煮沸3-5分钟,12000rpm离心1-2分钟,取1-2µL作为后续PCR模板。

制备样本小技巧:

1、沿用实验室已有处理样本的流程(液氮速冻,冻完尽快打样),原来怎么取样就怎么取,用钢珠怎么打样就怎么打。

2、然后尽快用牙签挑取一点打碎的样本到20ul裂解液中,这步非常关键,完全解决了因为客户采样多少带来的油多坏菜问题。

3、后续就按我们推荐的95度加热5分钟,然后12000rpm离心2分钟取1-2ul上清做PCR

经典案例展示:(感谢华南农业大学农学院周老师课题组美亲供图)






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