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    2×Tris-Tricine-SDS-PAGE
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    15-150 kDa
    23-170 kDa
    10-180 kDa
    10-250 kDa
    10-310 kDa
    DNA marker
    20bp DNA ladder
    100bp DNA ladder
    100bp ladder+
    1000bp ladder
    1000bp ladder+
    DL2000bp +
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    DNA提取
    动物大类(人)DNA提取
    植物类DNA提取
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超光速mix(无需提取基因组DNA) 
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128.00~8998.00
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品牌: 聚合美&科拜商城 储藏方法: 裂解液放置室温保存,澄清状态使用;其他试剂放置于-20℃保存
货号: MF848 规格: 1ml



超光速mix MF848)——温馨提示


一、产品说明


1、根据不同物种的基因组GC/AT含量不同,我们设置了几种2x PCRmix以完成实验

2、对于常见GC含量均衡物种推荐MF848系列

3、而对于松树、杨树、棉花、黄瓜等基因组GC含量比较低,推荐MF848-AT

4、某些海洋生物GC含量非常高,推荐MF848-GC

5、MF848MF848-ATMF848-GC三者唯一的区别就是2x PCR mix不同,其他组分和操作都相同。

6、常规物种超光速Mix系列产品表


MF848-01
M5 超光速mix(鼠尾,昆虫,拟南,水稻,玉米,小麦等)
1mL
MF848-10
10x1mL
MF848-100
100x1mL
MF848-AT-01
M5 AT物种超光速mix(特指番茄,土豆,棉花,黄瓜,杨树,松树等)
1mL
MF848-AT-10
10x1mL
MF848-AT-100
100x1mL
MF848-GC-01
M5 GC物种超光速mix(特指褐藻,小球藻等)
1mL
MF848-GC-10
10x1mL
MF848-GC-100
100x1mL



二、超光速mix (MF848)组成

1、裂解液叫“扩增最佳伴侣”(MF859

2、2x PCRmix

3、ddH2O

三、组分说明与取材建议

   本产品免基因组DNA提取:“扩增最佳伴侣(MF859)”的作用是裂解细胞,释放出DNA当模板(请摸索最适合您实验的最佳伴侣和样本的比例关系.

1、样本太多会超出最佳伴侣的处理上限,导致裂解不完全;

2、样本太少会造成模板浓过低,导致PCR失败

3、因为裂解液在特殊的情况下需要20-50uL标准裂解20uL处理体系,可能会有客户单独购买裂解液的需求,所以也可以单独购买(货号MF859)

4、在您收到本产品后,打开包装,将“扩增最佳伴侣”取出放在室温,使用前看看是否有沉淀,一定要确保裂解液没有沉淀,否则按说明书在37溶解澄清后使用。


  样本取样量建议

1、菌液、菌体和液体样本,推荐是10uL处理体系。

2、而植物和动物组织,推荐是20uL加入1-2 mm2的样本

3、对于比较难处理的组织可以用50-100uL裂解液。

磨小技巧可以通过看裂解液的颜色来判断是否充分破碎

将黄枪头用火灼烧融化成自制的研磨杵”,0.2mLPCR管中研磨幼嫩组织或者昆虫

成熟叶片或较大组织,加入50-100uL裂解液在1.5mL 离心管中用研磨旋转挤压破壁;

种子或很厚样本(杨树叶片)需要先用液氮研磨,再取少数样本加入50-100uL裂解液;

务必采用适合的研磨方式来破碎组织,让细胞充分破裂释放DNA   


  取样技巧简述流程

1、沿用实验室已有处理样本的流程(液氮速冻,冻完尽快打样),原来怎么取样就怎么取,用钢珠怎么打样就怎么打。

2、然后尽快用牙签挑取一点打碎的样本到20ul裂解液中,这步非常关键,完全解决了因为客户采样多少带来的油多坏菜问题。

3、后续就按我们推荐的95度加热5分钟,然后12000rpm离心2分钟取1-2ul上清做PCR

四、加裂解液后操作步骤

①沸水浴处理3-5分钟,如果实验室没有沸水浴,也可以用PCR98处理3-5分钟

②12000rpm离心1-2分钟,1-2uLPCR模板,剩余的放在-20保存一个月以上,以备后续再次检测。

再次取出做模板时,务必12000rpm离心1-2分钟才能取上清1-2uLPCR模板。

④对于多糖多酚的植物样本(比如棉花、烟草、番茄、杨树和一些海藻)和动物鼠尾等样本,在沸水浴冷却到室温,加入等体积的氯仿振荡处理,然后12000rpm离心2分钟取上清,效果会有很大改善。









M5 超光速mix(无需提取基因组DNA使用说明书



【产品类型】


产品名称规格货号
M5 超光速mix   1 mLMF848-01
M5 超光速mix   10×1 mLMF848-10
M5 超光速mix   100×1 mLMF848-100


储存条件


  1、超光速mix长期保存请置于-20˚C,有效期24个月。经常使用,可置于4˚C保存至少六个月。

     2、直接扩增最佳伴侣,收到后置于常温保存,如果4˚C-20˚C保存出现结晶,请将该试剂置于37℃水浴中重新溶解后摇匀使用。


【产品简介】


  本产品包含聚合美特制的M5 Hiper双超mix直接扩增最佳伴侣,可以迅速裂解酵母、农杆菌、革兰氏阳性菌、放线菌等微生物的细胞壁,短暂煮沸后的液体可以直接作为PCR模板;同样可以用于动植物组织细胞样品的裂解,是各种粗样品直接PCR的必备神器,可兼容普通Taq酶或高保真酶的下游PCR扩增。


  本产品包含聚合美特制Best W5 HiPer High-Fidelity DNA PolymerasedNTPsMgCl2、反应缓冲液、PCR反应的增强剂、优化剂以及稳定剂,浓度为Best W5 HiPer High-Fidelity DNA Polymerase比普通Taq酶扩增效率高、错配率低,具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好、扩增速度快(30-601kb等优点。

  可最大限度地减少人为误差,可用于高特异性PCR反应及GC含量较高(>60%)具有二级结构等复杂模板的扩增和大规模基因检测。PCR 产物是平末端,纯化后可直接用于TA 载体克隆(货号MF021MF022)

   本产品有含蓝色染料,在PCR 反应完成后,不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳;也可经过纯化处理,以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。红色染料可指示电泳进程,其迁移速度在1% TAE琼脂糖凝胶中与800 bp 双链DNA 片段相近。


【产品组份】

       

                                                                                        储存温度    MF848-01    MF848-10    MF848-100

2x M5 Hiper超光速mix (with bLue dye)               -20˚C            1 mL          10x1mL        100x1mL

M5 Hiper光速mix直接扩增最佳伴侣                   常温           2 mL          10x2mL        100x2mL

NucLease-free ddH2O                                            常温           1 mL         10x1mL        100x1mL


【适用范围】


       1.基因检测:本产品不同批次之间误差很小,特别适合大规模基因检测、半定量PCR实验和微量DNA的检测。

       2.用于从复杂模板中如基因组等扩增PCR产物,如表达基因的克隆、基因的定点突变和细胞内基因点突变的分析(SNP)等。


【所需试剂】


  使用者仅需准备PCR反应的模板引物等。



***【样本处理方法】***


A、裂解液处理组织样品时取样切勿太多10-20uL裂解液加入1-2mm21-2平方毫米)大小样本为宜!


B、裂解液处理后的用做PCR模板,加入的量不要超过PCR体系的1/10


1、菌液样品

    将培养至对数生长期的菌液(酵母、革兰氏阳性、农杆菌、放线菌培养液等)以菌液和裂解液体积比1:2混合5uL菌液:10uL最佳伴侣),直接沸水浴3-5分钟,短暂离心后取1-2µL作为后续PCR模板。

2、平板上的菌落

  用灭菌枪头挑取少量菌体,加入10 µL最佳伴侣,吹吸混匀,95 ˚C沸水浴3-5 分钟,12000rpm离心1-2分钟,1-2µL作为后续 PCR模板。

3、血液或其他液体样品(尿液、组织液或者各种体液)

     以液体样本和裂解液体积比1:2混合(5uL样本10uL最佳伴侣)95 ˚C煮沸3-5分钟,12000rpm离心1-2分钟,1-2µL作为后续PCR模板

4、植物组织样品(幼嫩叶片,果实、种子、根组织等)

       50uL裂解液加入2-3mm2样本,将固体样品尽量研磨,煮沸3-5分钟,棉花、烟草、杨树、番茄、柑橘多糖多酚类样本,等上述样本冷却到室温加入50uL氯仿,Vortex 10),12000rpm离心2分钟,1-2µL作为后续PCR模板


制备样本小技巧:

       ①、沿用实验室已有处理样本的流程(液氮速冻,冻完尽快打样),原来怎么取样就怎么取,用钢珠怎么打样就怎么打。

       ②、然后尽快用牙签挑取一点打碎的样本到20ul裂解液中,这步非常关键,完全解决了因为客户采样多少带来的油多坏菜问题。

       ③、后续就按我们推荐的95度加热5分钟,然后12000rpm离心2分钟取1-2ul上清做PCR


5、动物组织样品(鼠尾、鼠耳等组织)

20uL裂解液加入2mm2样本,将固体样品尽量研磨煮沸3-5分钟,鼠尾、鼠富含胶质样本,等上述样本冷却到室温加入20uL氯仿,Vortex 1012000rpm离心1-2分钟,1-2µL作为后续PCR模板。

6、 土壤等环境组织样品

20uL裂解液加入2mm22平方毫米)样本,将固体样品尽量研磨95 ˚C煮沸3-5分钟,12000rpm离心1-2分钟,1-2µL作为后续PCR模板。


PCR操作示例】


按下表配制PCR反应体系(冰上操作):
TempLate DNA(上述步骤准备)   1-2µL
2x M5 Hiper超光速mix (with bLue dye)                        10 μL
Primer 1 (10 μM)                     0.5 µL
Primer 2 (10 μM)                     0.5 µL
NucLease-free ddH2O补足至20 µL



建议的PCR条件
95°C3 min.
32-36 *cycLes of
94°C25 sec.
55–64°C25 sec.
72°C30-60sec.** / kb DNA
72°C5 min.
4°Cforever



PCR程序设置注意事项】

* 以粗提物为模板做PCR,因为模板量更少,PCR循环数应比用CTAB提取DNA做模板2-3个循环

**以粗提物为模板做PCR,杂质比较多,降低扩增速有利于得到稳定结果,建议延伸60/1kb


备注

本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时,本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。






聚合美 “超光速mix” 不同物种具体操作选择指南


致谢:真诚感谢所有为超光速mix使用技巧提出过宝贵建议的老师同学!

(集思广益,本指南将不断更新,推出更好更便捷方法)



  在阅读本指南之前,您是否曾经想过实验室植物种植程序是否合理?您还在大田先种植物,等植物长大再取样,脸朝黄土背朝天,挥汗如雨是必须的吗?您想过是否可以先把种子萌发,苗子稍微长大鉴定完毕再移栽?


新时代要用新方法!转基因鉴定和图位克隆先在实验室鉴定完毕再种地,事半功倍!


本指南拟解决的问题:不同物种的组织和细胞结构不同,需要特殊处理,才能做出最好的结果。


1)动物虽然不含细胞壁,但是组织中含有很多胶原等抑制PCR成分。


2)植物更复杂,细胞壁随着发育阶段成分不同,有蜡质角质等次生代谢物,加热并不能让这些物质破坏,必须通过研磨才能破坏,否则这些物质会阻碍破壁导致细胞内基因组DNA无法释放。


3)进化过程中很多植物产生了多糖多酚等物质来应对恶环境,这些多糖多酚物质对PCR有严重的抑制。



本指南拟解决的问题二:不同物种基因组GC含量不同,需要选择相匹配的mix,才能做出最好的结果。






管在手,鉴定无忧!


                                      ——聚合美温馨提示:请根据您研究的物种,选择相应的操作方法!


一、植物篇:限于篇幅很多成功案例没法展示,请按植物分类原则(以科为标准)选择相应方法:


十字花科:请参考拟南方法,具体物种包括盐、甘蓝、油菜、白菜等。(第3页)


禾本科:请参考水稻、玉米、小麦等方法,具体物种包括高粱、谷子、各种禾本科牧草及亲缘物种等。(第4,5,6页)


豆科:请参考大豆方法,具体物种包括鹰嘴豆、紫花苜蓿、百脉根、各种豆科牧草及亲缘物种等。(第7页)


蔷薇科:请参考苹果方法,具体物种包括玫瑰、梨树等。(第8页)


葫芦科:请参考甜瓜方法,具体物种包括西瓜、黄瓜等。(第9页)


茄科:多糖多酚物种,请参考烟草方法,具体物种包括番茄、马铃薯等。(第10页)(优先考虑用MF898


锦葵科:多糖多酚物种,请参考棉花方法,还在更新中。(优先考虑用MF898其次考虑MF848-AT


杨柳科:多糖多酚物种,请参考杨树方法,还在更新中。(优先考虑用MF898其次考虑MF848-AT


海洋藻类:多糖多酚物种,请参考小褐藻方法,还在更新中。(优先考虑用MF898其次考虑MF848-AT


二、动物篇:限于篇幅很多成功案例没法展示,请参考模式动物选择相应方法:


哺乳动物组织和细胞:请参考细胞处理方法。(第11页)


斑马鱼、线虫和昆虫:请参考褐飞虱、果蝇等方法。(第12页)


鸟类毛囊:已有成功案例


三、微生物篇:限于篇幅很多成功案例没法展示,请参考酵母等相应方法。(第13页)


  比如卵菌,霉菌,真菌菌丝,植物和菌体共生体等等


四、超光速mix选择技巧:


1、如果您研究的物种基因组GC含量正常,请选择MF848;


2、如果您研究的物种基因组GC含量低,请选择MF848-AT;


3、如果您研究的物种基因组GC含量高,请选择MF848-GC。





第一部分第一篇   拟南(十字花科图位克隆或转基因鉴定


细胞壁特性纤维素、果胶、少量角质和少量蜡质,裂解液和高温加热很容易破壁。

是否需要研磨需要简单研磨。

选择货号MF848

样本选择及相应处理方法:

方案1:

      待无菌培养基上拟南芥长出2-3片真叶,取最大这片真叶,细胞壁容易破碎(成熟叶片、茎或者种荚,研磨时需要更加使劲,其他地方不需要改变)。鉴定完毕后再移栽阳性苗到土里!

方案2:

  如果实验室已经有成熟的样本采集和磨样方法(八联排或者96孔板处理样本),一切照旧,只需在研磨完后向每个样本加入20µl裂解液,进行后续加热和离心操作。

处理方法:

1、采集用打孔器或者剪刀采集1-2mm2叶片到1.5ml离心管中;

Tips

①每采集完一个样本用清水或者75%乙醇清洗镊子、打孔器或者剪刀,然后用纸巾擦干后,方可进行第二个样本采集,以防交叉污染

②等所有样本采集完才进行第二步操作。

③如果采用八联排管或者96孔板处理样本,请确保实验室有相应的离心设备甩板离心机或其他离心机,需要考虑转速问题

2、研磨向每个离心管加入20-50µl裂解液(视样本老嫩软硬程度)利用研磨杵,用力旋转3-5次,根组织捣烂至裂解液变成米白色,叶片尽量捣烂至裂解液变成黄绿色;

3、加热:95 ˚C或沸水浴5分钟;

4、离心:12000rpm离心2分钟,取1-2µl作为后续PCR模板。

5、PCR程序调整1)扩增速度1kb/分钟;2)循环数比平时扩增程序增加2-3个。

经典案例展示

                                                                                                       

拟南芥.jpg   





第一部分第二篇   水稻(禾本科)图位克隆或转基因鉴定


细胞壁特性纤维素、果胶、大量角质和蜡质,裂解液和高温加热能够破壁。

是否需要研磨需要充分研磨。

选择货号MF848

样本选择可考虑鉴定完毕后,再移栽阳性苗到土里!

方案1:平皿上培养2周的幼苗根组织。

根部没有叶绿素,细胞壁特别薄,根尖的细胞密集,处理起来方便;

②水稻有很多须根,取几条做鉴定不影响苗子存活;

③鉴定完毕再移栽节省劳动力和实验室温室空间。

方案2:幼嫩叶片。

   细胞壁较好破碎成熟叶片或者种子,研磨时需要更加使劲,裂解液由20µl变成50µl

其他选择:

   如果实验室已经有成熟的样本采集和磨样方法(八联排或者96孔板处理样本),一切照旧,只需在研磨完后向每个样本加入20µl-50µl裂解液(视样本年龄和软硬程度),进行后续加热和离心操作。

处理方法

1、采集用镊子截取2-3条须根,或者用打孔器或者剪刀采集2-3mm2叶片到1.5ml离心管中;

         Tips

①每采集完一个样本用清水或者75%乙醇清洗镊子、打孔器或者剪刀,然后用纸巾擦干后,方可进行第二个样本采集,以防交叉污染

②等所有样本采集完才进行第二步操作。

③如果采用八联排管或者96孔板处理样本,请确保实验室有相应的离心设备甩板离心机或其他离心机,需要考虑转速问题

2、研磨向每个离心管加入20-50µl裂解液(视样本老嫩软硬程度)利用研磨杵,用力旋转3-5次,根组织捣烂至裂解液变成米白色,叶片尽量捣烂至裂解液变成黄绿色;

3、加热:95 ˚C或沸水浴5分钟;

4、离心:12000rpm离心2分钟,取1-2µl作为后续PCR模板。

5、PCR程序调整1)扩增速度1kb/分钟;2)循环数比平时扩增程序增加2-3个。


制备样本小技巧:

1、沿用实验室已有处理样本的流程(液氮速冻,冻完尽快打样),原来怎么取样就怎么取,用钢珠怎么打样就怎么打。

2、然后尽快用牙签挑取一点打碎的样本到20ul裂解液中,这步非常关键,完全解决了因为客户采样多少带来的油多坏菜问题。

3、后续就按我们推荐的95度加热5分钟,然后12000rpm离心2分钟取1-2ul上清做PCR

经典案例展示:(感谢福建农林郑老师供图)





第一部分第三篇   玉米禾本科图位克隆或转基因鉴定


细胞壁特性纤维素、果胶、大量角质和蜡质,裂解液和高温加热能够破壁。

是否需要研磨需要充分研磨。

选择货号MF848

样本选择可考虑鉴定完毕后,再移栽阳性苗到土里!

方案1:平皿上培养2周的幼苗根组织。

根部没有叶绿素,细胞壁特别薄,根尖的细胞密集,处理起来方便;

②玉米须根比较粗,取1条做鉴定不影响苗子存活;

③鉴定完毕再移栽节省劳动力和实验室温室空间。

方案2:幼嫩叶片。

   细胞壁较好破碎成熟叶片或者种子,研磨时需要更加使劲,裂解液由20µl变成50µl

其他选择:

   如果实验室已经有成熟的样本采集和磨样方法(八联排或者96孔板处理样本),一切照旧,只需在研磨完后向每个样本加入20µl-50µl裂解液(视样本年龄和软硬程度),进行后续加热和离心操作。

处理方法

1、采集用镊子截取2-3条须根,或者用打孔器或者剪刀采集2-3mm2叶片到1.5ml离心管中;

         Tips

①每采集完一个样本用清水或者75%乙醇清洗镊子、打孔器或者剪刀,然后用纸巾擦干后,方可进行第二个样本采集,以防交叉污染

②等所有样本采集完才进行第二步操作。

③如果采用八联排管或者96孔板处理样本,请确保实验室有相应的离心设备甩板离心机或其他离心机,需要考虑转速问题

2、研磨向每个离心管加入20-50µl裂解液(视样本老嫩软硬程度)利用研磨杵,用力旋转3-5次,根组织捣烂至裂解液变成米白色,叶片尽量捣烂至裂解液变成黄绿色;

3、加热:95 ˚C或沸水浴5分钟;

4、离心:12000rpm离心2分钟,取1-2µl作为后续PCR模板。

5、PCR程序调整1)扩增速度1kb/分钟;2)循环数比平时扩增程序增加2-3个。


制备样本小技巧:

1、沿用实验室已有处理样本的流程(液氮速冻,冻完尽快打样),原来怎么取样就怎么取,用钢珠怎么打样就怎么打。

2、然后尽快用牙签挑取一点打碎的样本到20ul裂解液中,这步非常关键,完全解决了因为客户采样多少带来的油多坏菜问题。

3、后续就按我们推荐的95度加热5分钟,然后12000rpm离心2分钟取1-2ul上清做PCR


经典案例展示:(感谢吉林农科院陈老师供图)


玉米.jpg






第一部分第四篇   小麦(禾本科)图位克隆或转基因鉴定


细胞壁特性纤维素、果胶、大量角质和蜡质,裂解液和高温加热能够破壁。

是否需要研磨需要充分研磨。

选择货号MF848

样本选择可考虑鉴定完毕后,再移栽阳性苗到土里!

方案1:平皿上培养2周的幼苗根组织。

根部没有叶绿素,细胞壁特别薄,根尖的细胞密集,处理起来方便;

②水稻有很多须根,取几条做鉴定不影响苗子存活;

③鉴定完毕再移栽节省劳动力和实验室温室空间。

方案2:幼嫩叶片。

   细胞壁较好破碎成熟叶片或者种子,研磨时需要更加使劲,裂解液由20µl变成50µl

其他选择:

   如果实验室已经有成熟的样本采集和磨样方法(八联排或者96孔板处理样本),一切照旧,只需在研磨完后向每个样本加入20µl-50µl裂解液(视样本年龄和软硬程度),进行后续加热和离心操作。

处理方法

1、采集用镊子截取2-3条须根,或者用打孔器或者剪刀采集2-3mm2叶片到1.5ml离心管中;

         Tips

①每采集完一个样本用清水或者75%乙醇清洗镊子、打孔器或者剪刀,然后用纸巾擦干后,方可进行第二个样本采集,以防交叉污染

②等所有样本采集完才进行第二步操作。

③如果采用八联排管或者96孔板处理样本,请确保实验室有相应的离心设备甩板离心机或其他离心机,需要考虑转速问题

2、研磨向每个离心管加入20-50µl裂解液(视样本老嫩软硬程度)利用研磨杵,用力旋转3-5次,根组织捣烂至裂解液变成米白色,叶片尽量捣烂至裂解液变成黄绿色;

3、加热:95 ˚C或沸水浴5分钟;

4、离心:12000rpm离心2分钟,取1-2µl作为后续PCR模板。

5、PCR程序调整1)扩增速度1kb/分钟;2)循环数比平时扩增程序增加2-3个。


制备样本小技巧:

1、沿用实验室已有处理样本的流程(液氮速冻,冻完尽快打样),原来怎么取样就怎么取,用钢珠怎么打样就怎么打。

2、然后尽快用牙签挑取一点打碎的样本到20ul裂解液中,这步非常关键,完全解决了因为客户采样多少带来的油多坏菜问题。

3、后续就按我们推荐的95度加热5分钟,然后12000rpm离心2分钟取1-2ul上清做PCR


经典案例展示:(感谢中国农科院作物所小麦组老师供图)

                             

                               小麦.jpg





大豆(豆科)图位克隆或转基因鉴定


细胞壁特性纤维素、果胶、大量角质和蜡质,裂解液和高温加热能够破壁。

是否需要研磨需要充分研磨。

选择货号MF848

样本选择可考虑鉴定完毕后,再移栽阳性苗到土里!

  方案1:平皿上培养2周的幼苗根组织。

         ①根部没有叶绿素,细胞壁特别薄,根尖的细胞密集,处理起来方便;

         ②大豆长出侧根后,2-3条做鉴定不影响苗子存活

         ③鉴定完毕再移栽节省劳动力和实验室温室空间。

  方案2:幼嫩叶片。

   细胞壁较好破碎成熟叶片或者种子,研磨时需要更加使劲,裂解液由20µl变成50µl

  其他选择:如果实验室已经有成熟的样本采集和磨样方法(八联排或者96孔板处理样本),一切照旧,只需在研磨完后向每个样本加入20µl-50µl裂解液(视样本年龄和软硬程度),进行后续加热和离心操作。

处理方法:

1、采集用镊子截取2-3条侧根,或者用打孔器或者剪刀采集2-3mm2叶片到1.5ml离心管中;

        Tips

①每采集完一个样本用清水或者75%乙醇清洗镊子、打孔器或者剪刀,然后用纸巾擦干后,方可进行第二个样本采集,以防交叉污染

②等所有样本采集完才进行第二步操作。

③如果采用八联排管或者96孔板处理样本,请确保实验室有相应的离心设备甩板离心机或其他离心机,需要考虑转速问题

2、研磨向每个离心管加入20-50µl裂解液(视样本老嫩软硬程度)利用研磨杵,用力旋转3-5次,根组织捣烂至裂解液变成米白色,叶片尽量捣烂至裂解液变成黄绿色;

3、加热:95 ˚C或沸水浴5分钟;

4、离心:12000rpm离心2分钟,取1-2µl作为后续PCR模板。

5、PCR程序调整1)扩增速度1kb/分钟;2)循环数比平时扩增程序增加2-3个。


制备样本小技巧:

1、沿用实验室已有处理样本的流程(液氮速冻,冻完尽快打样),原来怎么取样就怎么取,用钢珠怎么打样就怎么打。

2、然后尽快用牙签挑取一点打碎的样本到20ul裂解液中,这步非常关键,完全解决了因为客户采样多少带来的油多坏菜问题。

3、后续就按我们推荐的95度加热5分钟,然后12000rpm离心2分钟取1-2ul上清做PCR


经典案例展示:(感谢中国农科院作物所大豆组郭勇老师供图)

                             

                                                                                                                          M       1        2        3


1和2都是超光速mix裂解液处理,3是CTAB提取DNA做模板,同一个PCR程序




第一部分第六篇   苹果(蔷薇科)图位克隆或转基因鉴定


细胞壁特性:纤维素、果胶、大量角质和蜡质,细胞内含有大量多糖多酚物质,裂解液和高温加热能够破壁。


是否需要研磨:需要充分研磨。


选择货号:优先选择MF898,可以尝试MF848-AT


样本选择:可考虑请鉴定完毕后再移栽阳性苗到土里!


  方案:幼嫩叶片。

   细胞壁较好破碎成熟叶片或者种子,研磨时需要更加使劲,裂解液由20µl变成50µl

  其他选择:如果实验室已经有成熟的样本采集和磨样方法(八联排或者96孔板处理样本),一切照旧,只需在研磨完后向每个样本加入20µl-50µl裂解液(视样本年龄和软硬程度),进行后续加热和离心操作。

处理方法:

1、采集用镊子截取2-3条侧根,或者用打孔器或者剪刀采集2-3mm2叶片到1.5ml离心管中;

         Tips

①每采集完一个样本用清水或者75%乙醇清洗镊子、打孔器或者剪刀,然后用纸巾擦干后,方可进行第二个样本采集,以防交叉污染

②等所有样本采集完才进行第二步操作。

③如果采用八联排管或者96孔板处理样本,请确保实验室有相应的离心设备甩板离心机或其他离心机,需要考虑转速问题

2、研磨向每个离心管加入20-50µl裂解液(视样本老嫩软硬程度)利用研磨杵,用力旋转3-5次,根组织捣烂至裂解液变成米白色,叶片尽量捣烂至裂解液变成黄绿色;

3、加热:95 ˚C或沸水浴5分钟;

4、离心:12000rpm离心2分钟,取1-2µl作为后续PCR模板。

5、PCR程序调整1)扩增速度1kb/分钟;2)循环数比平时扩增程序增加2-3个。


经典案例展示:(感谢西北农林大学赵老师供图)

                             

苹果.png




第一部分第七篇   甜瓜(葫芦科)图位克隆或转基因鉴定


细胞壁特性纤维素、果胶、大量角质和蜡质,裂解液和高温加热能够破壁。

是否需要研磨需要充分研磨。

选择货号MF848

样本选择可考虑鉴定完毕后,再移栽阳性苗到土里!

方案1:平皿上培养2周的幼苗根组织。

根部没有叶绿素,细胞壁特别薄,根尖的细胞密集,处理起来方便;

②甜瓜长出侧根后,取1条做鉴定不影响苗子存活;

③鉴定完毕再移栽节省劳动力和实验室温室空间。

方案2:幼嫩叶片。

   细胞壁较好破碎成熟叶片或者种子,研磨时需要更加使劲,裂解液由20µl变成50µl+

其他选择:

   如果实验室已经有成熟的样本采集和磨样方法(八联排或者96孔板处理样本),一切照旧,只需在研磨完后向每个样本加入20µl-50µl裂解液(视样本年龄和软硬程度),进行后续加热和离心操作。

处理方法

1、采集用镊子截取2-3条须根,或者用打孔器或者剪刀采集2-3mm2叶片到1.5ml离心管中;

         Tips

①每采集完一个样本用清水或者75%乙醇清洗镊子、打孔器或者剪刀,然后用纸巾擦干后,方可进行第二个样本采集,以防交叉污染

②等所有样本采集完才进行第二步操作。

③如果采用八联排管或者96孔板处理样本,请确保实验室有相应的离心设备甩板离心机或其他离心机,需要考虑转速问题

2、研磨向每个离心管加入20-50µl裂解液(视样本老嫩软硬程度)利用研磨杵,用力旋转3-5次,根组织捣烂至裂解液变成米白色,叶片尽量捣烂至裂解液变成黄绿色;

3、加热:95 ˚C或沸水浴5分钟;

4、离心:12000rpm离心2分钟,取1-2µl作为后续PCR模板。

5、PCR程序调整1)扩增速度1kb/分钟;2)循环数比平时扩增程序增加2-3个。


制备样本小技巧:

1、沿用实验室已有处理样本的流程(液氮速冻,冻完尽快打样),原来怎么取样就怎么取,用钢珠怎么打样就怎么打。

2、然后尽快用牙签挑取一点打碎的样本到20ul裂解液中,这步非常关键,完全解决了因为客户采样多少带来的油多坏菜问题。

3、后续就按我们推荐的95度加热5分钟,然后12000rpm离心2分钟取1-2ul上清做PCR


经典案例展示:(感谢西北农林大学丁磊博士供图)                             

                       





   烟草、番茄、马铃薯(茄科)图位克隆或转基因鉴定


细胞壁特性:纤维素、果胶、大量角质和蜡质,细胞内含有大量多糖多酚物质,裂解液和高温加热能够破壁。


是否需要研磨:需要充分研磨。


选择货号:优先选择MF898,可以尝试MF848-AT


片段长度:尽量不要超过500bp,如果大于500bp,请用聚合美超保真mix(MF743)


样本选择:可考虑请鉴定完毕后再移栽阳性苗到土里!


  方案1:平皿上培养2周的幼苗根组织。

         ①根部没有叶绿素,细胞壁特别薄,根尖的细胞密集,处理起来方便;

         ②长出侧根后,2-3条做鉴定不影响苗子存活

         ③鉴定完毕再移栽节省劳动力和实验室温室空间。

  方案2:幼嫩叶片。

   细胞壁较好破碎成熟叶片或者种子,研磨时需要更加使劲,裂解液由20µl变成50µl

  其他选择:如果实验室已经有成熟的样本采集和磨样方法(八联排或者96孔板处理样本),一切照旧,只需在研磨完后向每个样本加入20µl-50µl裂解液(视样本年龄和软硬程度),进行后续加热和离心操作。



***【样本处理方法】***


A、裂解液处理组织样品时取样切勿太多10-20uL裂解液加入1-2mm21-2平方毫米)大小样本为宜!


B、裂解液处理后的用做PCR模板,加入的量不要超过PCR体系的1/10


1、菌液样品

    将培养至对数生长期的菌液(酵母、革兰氏阳性、农杆菌、放线菌培养液等)以菌液和裂解液体积比1:2混合5uL菌液:10uL最佳伴侣),直接沸水浴3-5分钟,短暂离心后取1-2µL作为后续PCR模板。

2、平板上的菌落

  用灭菌枪头挑取少量菌体,加入10 µL最佳伴侣,吹吸混匀,95 ˚C沸水浴3-5 分钟,12000rpm离心1-2分钟,1-2µL作为后续 PCR模板。

3、血液或其他液体样品(尿液、组织液或者各种体液)

     以液体样本和裂解液体积比1:2混合(5uL样本10uL最佳伴侣)95 ˚C煮沸3-5分钟,12000rpm离心1-2分钟,1-2µL作为后续PCR模板

4、植物组织样品(幼嫩叶片,果实、种子、根组织等)

       50uL裂解液加入2-3mm2样本,将固体样品尽量研磨,煮沸3-5分钟,棉花、烟草、杨树、番茄、柑橘多糖多酚类样本,等上述样本冷却到室温加入50uL氯仿,Vortex 10),12000rpm离心2分钟,1-2µL作为后续PCR模板


制备样本小技巧:

       ①、沿用实验室已有处理样本的流程(液氮速冻,冻完尽快打样),原来怎么取样就怎么取,用钢珠怎么打样就怎么打。

       ②、然后尽快用牙签挑取一点打碎的样本到20ul裂解液中,这步非常关键,完全解决了因为客户采样多少带来的油多坏菜问题。

       ③、后续就按我们推荐的95度加热5分钟,然后12000rpm离心2分钟取1-2ul上清做PCR


5、动物组织样品(鼠尾、鼠耳等组织)

        20uL裂解液加入2mm2样本,将固体样品尽量研磨煮沸3-5分钟,鼠尾、鼠富含胶质样本,等上述样本冷却到室温加入20uL氯仿,Vortex 1012000rpm离心1-2分钟,1-2µL作为后续PCR模板。

6、 土壤等环境组织样品

       20uL裂解液加入2mm22平方毫米)样本,将固体样品尽量研磨95 ˚C煮沸3-5分钟,12000rpm离心1-2分钟,1-2µL作为后续PCR模板。



制备样本小技巧:

1、沿用实验室已有处理样本的流程(液氮速冻,冻完尽快打样),原来怎么取样就怎么取,用钢珠怎么打样就怎么打。

2、然后尽快用牙签挑取一点打碎的样本到20ul裂解液中,这步非常关键,完全解决了因为客户采样多少带来的油多坏菜问题。

3、后续就按我们推荐的95度加热5分钟,然后12000rpm离心2分钟取1-2ul上清做PCR



经典案例展示:(感谢华南农业大学农学院周老师课题组美亲供图)






第二部分第一篇 细胞和血液鉴定


包括尿液、组织液或者各种体液



细胞壁特性:没有细胞壁,裂解液和高温加热很容易裂解。

是否需要研磨:不需要。

选择货号:MF848。

样本处理方式:

1、 培养细胞

  将培养好的细胞(1µl不要超过100个细胞),以细胞悬液和裂解液按1:20混合(1µl细胞液:20µl裂解液),95 ˚C或沸水浴3-5分钟,12000rpm离心1-2分钟后取1µl作为后续PCR模板。(细胞加多反而抑制PCR,切勿加多)

2、血液或其他液体样品(尿液、组织液或者各种体液)

  以液体样本和裂解液体积比1:2混合(5µl样本:10µl裂解液),95 ˚C或煮沸3-5分钟,12000rpm离心1-2分钟,取1µl作为后续PCR模板。

PCR程序调整: 1)延伸速度30-60秒/1kb;2)循环数比平时扩增程序增加2个。




第二部分第二篇   褐飞虱(昆虫)转基因鉴定


细胞壁特性:昆虫类似植物,表面有大量角质和蜡质,裂解液和高温加热能够破壁。

是否需要研磨:简单研磨。

选择货号:MF848

样本选择:整个虫子(成虫或者幼虫都可以),或者取一条腿,一个翅膀。

处理方法:

1、自制研磨杵和采样:


①将黄吸头用火灼烧后,吸头会因融化闭口,待冷却后,会自然形成一个自制的小研磨杵;


将单头褐飞虱放入 0.2ml 的PCR管中,加入20ul裂解液;


如果采用八联排或者96孔板处理样本,请确保实验室有相应的离心设备。


2研磨:用小研磨杵在PCR管中模拟实际研磨杵在1.5ml EP管中的研磨动作;


3、加热95 ˚C或沸水浴3-5分钟;


4、离心12000rpm离心2分钟,取1µl作为后续PCR模板。


5、PCR程序调整:1)扩增速度1kb/分钟;2)循环数比平时扩增程序增加2-3个。


经典案例展示:(感谢中国农业科学院植保所龚老师供图)

                             

             

虫子.jpg




虫子2.jpg





                             



第三部分第一篇 菌类鉴定

酵母、农杆菌、革兰氏阳性菌、古菌、放线菌、霉菌、卵菌等其他真菌)



细胞壁特性:为肽聚糖、葡聚糖、纤维素和几丁质,裂解液和高温加热很容易破壁


是否需要研磨:不需要


选择货号:MF848


样本处理方式:


1、 菌液样品

  将培养至对数生长期的菌液,以菌液和裂解液体积比1:2混合(5µl菌液:10µl最佳伴侣),95 ˚C或沸水浴3-5分钟,短暂离心后取1µl作为后续PCR模板。


2、 平板上的菌落


  用灭菌枪头挑取少量菌体,加入10 µl最佳伴侣,吹吸混匀,95 ˚C或沸水浴3-5 分钟,12000rpm离心1-2分钟,取1-2µl作为后续 PCR模板。


PCR程序调整: 1)延伸速度30-60秒/1kb;2)循环数比平时扩增程序增加2个。


经典案例展示


菌液PCR.jpg



酵母.jpg








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